Comparação de três tampões para extração de DNA genômico de tecidos foliares de <em>Eucalyptus camaldulensis</em> Dehnh

  • Adriana Zanirato Contini da Silva FAPEMAT
  • Reginaldo Brito da Costa Universidade Federal de Mato Grosso, Cuiabá, MT
  • Daniela Tiago da Silva Campos Universidade Federal de Mato Grosso, Cuiabá, MT
Palavras-chave: análises moleculares, CTAB, proteinase K.

Resumo

A obtenção de DNA genômico de qualidade e em quantidade suficiente é o primeiro passo para o desenvolvimento das diversas técnicas moleculares que avaliam o polimorfismo em sua sequência. A presença de fenóis, polissacarídeos e de outros componentes representa o principal problema na extração de DNA e na aplicação subsequente, restringindo a eficiência do processo. Este trabalho tem como objetivo comparar três tampões de extração de DNA genômico de folhas jovens, maduras de Eucalyptus camaldulensis, e para tanto se utilizou o protocolo CTAB (brometo de cetiltrimetilamônio) com as seguintes modificações: Tampão 1, seguiu-se a descrição do protocolo, sem alterações; Tampão 2, ao protocolo, adicionou-se 2% de PVP (20 ug mL-1 do tampão de extração); Tampão 3, ao protocolo, adicionou-se 2% de PVP (20 ug mL-1 do tampão de extração) e 50 uL de Proteinase K (20 ug mL-1 do tampão de extração). A quantificação do DNA total foi realizada de três formas, eletroforese em gel de agarose [0,8%], espectrofotômetro Biospectro SP-220®, e em nano-espectrofotômetro quantificador. De maneira geral, o protocolo de extração com suas modificações permitiu a obtenção de quantidades satisfatórias e de boa qualidade de DNA, visualizadas primeiramente pelas imagens no gel de agarose, e confirmadas pela concentração calculada por absorbância nos outros dois métodos, contudo os tampões 1 e 2 proporcionaram os melhores resultados quantitativos e qualitativos.

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Publicado
2015-11-26